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Erfindung
Russische Föderation Patent RU2289813

Verfahren zum Nachweis von Trichomonas Forms

Verfahren zum Nachweis von Trichomonas Forms

Name des Erfinders: Garas'ko Ekaterina (RU); Moreva Jeanne Germanovna (RU)
Der Name des Patentinhabers: Staatliche Bildungs Hochschule "Ivanovo State Medical Academy der Russischen Föderation Ministerium für Gesundheit" (RU)
Korrespondenzanschrift :. 153.012, Ivanovo, pr Engels, 8, GOU VPO "Ivanovo State Medical Academy der Russischen Föderation Ministerium für Gesundheit"
Startdatum des Patents: 2004.11.09

Die Erfindung bezieht sich auf die Medizin, insbesondere der medizinischen Mikrobiologie. Zur Identifizierung von Formen Trichomonas produzieren Blutkultur in Medium, das mit Terrasse für 5 bis 10 Minuten inaktiviert bei + 56 ° C in menschlichem Blut oder Pferdeserum und Antibiotika in einer Menge von 500 U / ml. Die Kultur wurde bei + 37 ° C für 2 Tage inkubiert, Machen subkultiviert auf ein ähnliches Medium, jedoch mit Pferdeserum oder menschlichem Blut, inaktivierte für 15-20 Minuten, und Antibiotika, in einer Menge von 250 U / ml. Erneut inkubiert für 2 Tage bei + 37 ° C. Stellen auf einem Medium, das Serum enthält, inaktiviert für 30 Minuten ohne Zusatz von Antibiotika subkultiviert, und die Probe wurde bei + 37 ° C für 2 Tage inkubiert. 1-2 Nachsaat mit vollständig inaktiviertes Humanserum oder Pferde ohne Zusatz von Antibiotika auf einem Medium durchgeführt wird. Durch die auf der aktiven Knospung gehen oder Schizogonie die lebendige Gegenwart von atypischen Formen von Trichomonaden, und in Abwesenheit von Reproduktion von degenerativen, abklingende Formen beurteilen. die Methode macht es möglich, atypische Trichomonaden zu identifizieren.

BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG

Die Erfindung bezieht sich auf die Medizin, und zwar auf der Geburtshilfe und Gynäkologie, Parasitologie, Hämatologie, Urologie, Venerologie, Medizinische Mikrobiologie.

Nach der Literatur bekannten Methoden zur aus klinischen Proben Trichomonas vaginalis detektieren. Die zuverlässigste Methode ist eine Kultur, die zum Nachweis von Trichomonas typischen Formen im Material auf Nährböden dient. Das größte Wachstum Qualität manifestiert sich in Produkte komplexer Zusammensetzung, wie Terrasse oder Johnson-Trussell als Hauptkomponenten Leber-Brühe, die, Ringer-Lösung, Pepton, Maltose, Agar-Agar, L-Cystein als ein bereichernder Faktor Serum menschlichen oder Pferdeblut inaktiviert für 30 Minuten bei + 56 ° C. Um die beigefügten Mikroflora zu unterdrücken, zu dem Medium die Antibiotika Penicillin zugesetzt, Streptomycin, Nystatin und in einer Menge von 1500-2000 U / ml, die zuvor in Ringerlösung gelöst. Stellen Sie Medium pH-Wert 6,0-6,3.

Das Wesen der bekannten Verfahren dadurch, daß nach dem Zaunmaterial mit pathologischen Schleimhaut Harnorgane wird Impfverfahren die Flüssigkeit Inokulation erfolgt das Nährmedium, gefolgt von einer Inkubation bei + 37 ° C für 5-7 Tage (B.V.Klimenko, E.R.Avazov et al. Trichomoniasis Männer, Frauen und Kinder. Saint-Petersburg, OOO "Story", 2001, s.131-138). Jedoch bekannt Wohnung Trichomonas nicht nur auf die Schleimhäute von urogenitalen Organe, sondern auch im peripheren Blut, wo Trichomonas, während in nicht ihrem gewohnten Lebensraum, eine beträchtliche Anzahl von atypischen Formen und Verfahren präsentiert damit kulturell atypischen Formen Trichomonas Blut zu identifizieren, jetzt nicht entwickelt (PPSemenov, V.P.Semenov Trichomonas Niederlage der urogenitalen Organe. L. Dep th, "Medizin", 1972, s.23-25).

Der Nachteil dieser Verfahren besteht darin, dass sie nicht die Identifizierung von atypischen Formen Trichomonas, insbesondere in Blutkulturen erlauben, die, geringe metabolische Aktivität zeigt, kaum in Nährmedien vermehrt.

Das technische Ergebnis des vorgeschlagenen Verfahrens ist es, atypische Trichomonaden identifizieren, indem zu dem Kulturmedium von menschlichen Serum- oder Pferdeserum Zugabe durch eine Erhöhung der Zeit der Inaktivierung von 5 bis 30 Minuten in drei Phasen durchgeführt wird, die die proliferative Aktivität der Elementarzellen aktiviert.

Dieses Ergebnis wird dadurch erzielt, dass das Nährmedium Stressfaktor hinzugefügt wird - biologisch aktive Substanz - Humanserum oder Pferd nur inaktiviert, die sich durch Sprossung oder Schizogonie amoeboid, zystenartige oder verschiedene unregelmäßig, ohne Kern und feste Formen von Trichomonas mit geringen metabolischen aktive Reproduktion fördert Aktivität.

Vorgeschlagenen Verfahrens ist wie folgt:

Blut aus einer Vene des Patienten entnommen, mindestens 2,0 ml wurden mit 15 U / ml Heparin gemischt und gegossen in Zentrifugenröhrchen in einer Menge von nicht mehr als 1 ml in jedes. Die Proben wurden für 20-30 Minuten bei 3000 U / min zentrifugiert. Nachdem der Überstand Flüssigkeitsanteil - der dekantierten Plasma und der Rückstand in 0,5 ml wird mit einer Pasteur-Pipette in 4 ml Kulturmedium inokuliert. Die erste Passage atypischen Formen in einem Kulturmedium mit Terrasse als Stressfaktor ergänzt und Humanserum oder Pferd für 5-10 Minuten bei + 56 ° C inaktiviert Anreicherung Um die Begleitflora Antibiotika zu dem Medium in einer Menge von 500 U / ml Penicillin, Streptomycin und Nystatin, die eine zusätzliche Spannungsfaktor zu unterdrücken.

Die Kultur wurde 2 Tage lang bei + 37 ° C unter einer Schicht Paraffinöl anaerobe Bedingungen zu schaffen. Dann machen Sie eine ähnliche Umgebung Nachsaat, enthält aber weniger Stressfaktor: teilweise inaktiviert Humanserum oder Pferd (15-20 Minuten) und Antibiotika in einer Menge von 250 U / ml. Proben wurden bei + 37 ° C inkubiert, Nach 2 Tagen eine dritte Passage der Kultur auf Mediums keine Stressfaktoren, Antibiotika und Blut vollständig inaktivierte Serum (30 min Inaktivierung Zeit bei + 56 ° C) enthält. Proben wurden für 2 Tage bei + 37 ° C inkubiert. Führen Sie dann eine andere 1-2 Kulturmedium Nachsaat und keine Stressfaktoren enthält. Eine solche verlängerte Passagierbarkeit erlaubt die Isolierung einer reinen Kultur von Trichomonas, die die höchste Anzahl von verschiedenen typischen und atypischen Formen in Form von weißlich Boden Suspension enthält.

Das vorgeschlagene Verfahren ermöglicht eine Diagnose einer atypischen culture - amoeboid und abgerundet, und verschiedene Änderungen und unregelmäßig geformten Trichomonas: Dumbbell, biskvitovidnyh und andere unterschiedlich groß, auch wenn sie in klinischen Proben in einer einzigen Menge vorhanden sind. Dies geschieht unter dem Einfluß des weak-inaktiviertem humanem Serum oder Pferd, das ein Stressfaktor ist, durch Knospung oder Trichomonas Schizogonie zum Zwecke der Selbsterhaltung des aktiven Fortpflanzung verursacht.

Dieser Vorgang ist wichtig in der Diagnose von Trichomoniasis verallgemeinert, wenn die Infektion asymptomatisch und latent ist, und der Erreger der atypischen einer Form weist eine geringe Stoffwechselaktivität, die nur schwer mit herkömmlichen Kulturdiagnoseverfahren zu erfassen.

Beispiel 1

Patient Kiricheva R., 64 Jahre.

Diagnose: cr Kolon. In der Geschichte der Trichomonas coleitis. Für die Behandlung verordnet protistotsidnye Drogen. Nach dem ersten Durchgang , wenn Blutkulturen ergab 36 Trichomonas × 10 5 Zellen / ml. Nach 5 Durchgängen in Kulturmedium erhöhte die Anzahl der Trichomonaden bis 280 × 10 5 Zellen / ml. Folglich zeigte der Patient Live-typischen und atypischen Formen von Trichomonaden.

Beispiel 2

Bezruchenkova Patient A., Alter 67 Jahre.

Diagnose: cr sigmae. In der Geschichte der Trichomonas coleitis. Für die Behandlung verordnet protistotsidnye Drogen. Nach dem ersten Durchgang , wenn Blutkulturen ergab 18 Trichomonas × 10 4 Zellen / ml. Nach 5 Passagen wurden in einem Nährmedium, und die Anzahl von Trichomonas verringert beobachtet. Folglich zeigte der Patient degenerative Formen der Trichomonas zerfallen.

FORDERUNGEN

Ein Verfahren zum Formen Trichomonas Detektieren, umfassend ein biologisches Material in einem Nährmedium Animpfen inaktivierten Humanserum und Antibiotika enthält, oder Pferd, in die produzieren Blutkulturen in Terrace Medium mit Humanserum oder Pferde inaktiviert für 5-10 Minuten bei ergänzt gekennzeichnet Temperatur + 56 ° C, und Antibiotika, in einer Menge von 500 U / ml - Penicillin, Streptomycin und Nystatin; dann wurde die Kultur 2 Tage bei +37 ° C inkubiert, Einsaat ein ähnliches Medium macht aber menschliches Blutserum oder Pferde inaktivierten für 15-20 min und Antibiotika in einer Menge von 250 U / ml enthielt, wurde die Inkubation für 2 Tage wiederholt durch bei + 37 ° C; dann macht mit Medium, das Serum, inaktiviert für 30 Minuten, ohne Zusatz von Antibiotika und die Probe bei + 37 ° C für 2 Tage inkubiert Nachsaat, gefolgt von 1-2 auf dem Medium getragen wird, mit vollständig inaktiviertes Humanserum oder Pferde Subkultivierung ohne Zusatz von Antibiotika, und was aktiv Knospung vorgeht oder Schizogonie die lebendige Gegenwart von atypischen Formen von Trichomonaden, und in Abwesenheit von Reproduktion beurteilen - eine degenerative, abklingende Formen.

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Erscheinungsdatum 06.01.2007gg