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Erfindung
Russische Föderation Patent RU2043767

Verfahren zur Hemmung der HIV-Infektion

Verfahren zur Hemmung der HIV-Infektion

Name des Erfinders:. AV Asaph; Bezyulev VV. Anosova IG
Der Name des Patentinhabers: Forschungs- und Produktionsunternehmen "Farmek"
Adresse für die Korrespondenz:
Startdatum des Patents: 1993.05.24

Die Erfindung betrifft die Medizin und kann verwendet werden, HIV-Infektion zu hemmen, das AIDS verursacht beim Menschen. Das Wesen der Erfindung besteht darin, daß für die Unterdrückung der HIV-Infektion unter Verwendung von exogenen DNA-Komplexe mit mehrwertigen Metallen. Das Verfahren hat eine hohe antivirale Aktivität bei geringer Toxizität.

BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG

Die Erfindung bezieht sich auf die Medizin, und zwar auf der Virologie und kann verwendet werden , HIV - Infektion zu hemmen , das AIDS verursacht beim Menschen.

Der Anstieg der Morbidität und Mortalität von AIDS bei Unmöglichkeit, eine wirksame Behandlung zu erhöhen macht es für neue Medikamente zur Suche relevanten HIV zu bekämpfen.

Bekannte Verfahren zur Hemmung der HIV-Infektion Nukleotidanaloga, umfassend das Verabreichen, insbesondere 3-asu-3-Desoxythymidin-AZT. Jedoch ist dieses Medikament wirksam in den frühen Stadien der Erkrankung und auch in therapeutischen Dosen ist hochgiftig, eine klinische Komplikationen (Kopfschmerzen, Anämie, Erkrankungen des Magen-Darm-Trakt) zu geben, die Begrenzung ihrer Nutzung. Bekannte Verfahren, umfassend die Verabreichung diftorirovannyh Nukleosiden, Nukleosid-Analoga Liposom, aber ihre Effizienz gering ist.

Der Zweck der Erfindung, ein wirksames Verfahren zur Hemmung der HIV-Infektion zu entwickeln, die einen hohen Wirkungsgrad bei geringer Toxizität verbindet.

Das vorgeschlagene Verfahren besteht darin, dass sie mit mehrwertigen Metallen (Zink, Nickel, Kobalt, Eisen) im Verhältnis von 1-Komplex des Natriumsalzes der Desoxyribonucleinsäure (DNA): 1 bis 1: 1000 und die Verabreichung der Zubereitung erfolgt subcutan erfolgen, intraperitoneal, intranasal oder Spinalkanal auf der Form der Krankheit in einer therapeutisch äquivalenten Dosen abhängig.

Die wesentlichen Merkmale der Erfindung sollte innerhalb des Verfahrens unter Verwendung des Natriumsalzes von DNA, komplexiert mit mehrwertigen Metallen, entsprechend Indikationen bisher ungenutzte, deren Proportionen und Dosis und Verabreichung Regimen und Formulierungen in Betracht gezogen werden. Zum ersten Mal eine antivirale Wirkung bei verschiedenen Arten der Verabreichung des Arzneimittels zu erhalten, die Möglichkeit, die in unterschiedlichen klinischen Formen von AIDS ist sehr wichtig, pulmonale, gastrointestinal, ZNS-Läsionen.

DNA-Natriumsalz-Verbindungen komplexe Metall besteht aus niedrigem Molekulargewicht Natriumsalz der DNA enthält nizkopolimernoy mindestens 80% des Natriumsalzes der nativen DNA von Stör milt abgeleitet und hat die folgenden Eigenschaften: Mol. 270-500 m 10 3 Dalton hyperchromen Effekt: 37% weniger als 1% Protein auf das Gewicht, nicht mehr als 17% Feuchtigkeitsgewichts Molverhältnisse von Adeninnucleotiden Thymin 29,0 27,0 22,0 Guanin, Cytosin und 20,0 mehrwertige Metall nämlich Zink (Zn), Kobalt (Co), Nickel (Ni), Eisen (Fe).

HIV in in vitro-Systemen unter Verwendung von Na-DNA-Komplexe mit Zink, Kobalt, Eisen und Nickel in unterschiedlichen Konzentrationen der Komponenten zu unterdrücken. "Willkommen" Unternehmen haben AZT Produktion Vergleich verwendet. Die antivirale Aktivität der Zubereitungen wurde unter Verwendung der Methoden, die von der WHO für diesen Zweck empfohlen bewertet. Kultur wurden kontinuierliche Zellinien CEM-SS und MT-4 verwendet. Zellen wurden in einer Konzentration von (0,03-0,05) kultiviert × 10 5 Zellen pro 1 ml Medium RRMI 1640 mit 10% fötalem Kälberserum, 300 mg / ml L-Glutamin, 100 ug / ml Gentamycin und in Suspension gezüchtet. Die Lebensfähigkeit der Zellen wurde durch Färbung sie eine 0,4% trepanovogo blaue Lösung geprüft. Als Quelle der Virusstämme verwendet HIV / IVS und HIV-1, HTLV / IIIB.

Die Zellsuspension wurde in einer 24-Well-Platten platziert wurden mit verschiedenen Dosen des Medikaments und der HIV-Infizierten behandelt. Die Multiplizität der Infektion betrug 0,01 TPA 50 pro Zelle. Die Kulturen wurden bei 37 ° C in einer Atmosphäre mit 5% CO 2 bei 98% Luftfeuchte für 5-7 Tage , bis cytopathische Wirkung Bestimmung Virus in Zellkultur inkubiert.

Zur Beurteilung verwendet, um die Bildung von Virus-Antigen-Enzym-Immunoassay.

Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 gezeigt.

Aus der obigen Tabelle zeigt, dass, wenn sie in das Kulturmedium der DNA-Metall markiert Suppression der HIV-Infektion in vitro eingeführt. Darüber hinaus ist das optimale Verhältnis von DNA-Metall im Bereich von 1: 1-1: 1000. Dieser viralstatic Effekt mit geringer Zytotoxizität kombiniert. Wenn in das Kulturmedium des Arzneimittels eingeführt AZT haben eine hohe Zytotoxizität mit moderaten antivirale Wirkung.

Anschließend wurde bei Versuchstieren in dem System in vivo getestet, die Toxizität von Arzneimitteln, die durch Verwendung des vorgeschlagenen Verfahrens.

Die Versuche wurden parallel an allen vier codierten Präparationen gegenüber AZT in Dosen von 5, 10, 20, 35 und 50 mg / kg durchgeführt. Toxizitätsstudien und vier Drogen Azidothymidin nichtlineare auf albino Mäusen mit einem Gewicht von 6-7 g verschiedene Konzentrationen von Medikament pro Kilogramm Körpergewicht der Tiere in einem Volumen von 0,2 ml in der Form von subkutanen, intranasale und intraperitoneale Injektion und 0,03 ml Volumen in Form von intrazerebralen Injektion . Die Tiere wurden unter Beobachtung gehalten für 2 Wochen, dann 50 LD wurde durch das Verfahren Curber berechnet. Für eine Dosis von LD 50 wurde eine tödliche Dosis des Medikaments, die den Tod von 50% der Tiere verursacht.

Die Ergebnisse der Toxizitätsuntersuchungen dieser Präparate sind in Tabelle 2 angegeben.

Die Tabellen zeigen, dass alle fünf Medikamente, unabhängig von der Dosis auf weiße Mäuse mit einem Gewicht von 5-7 g subkutan, intranasal, intra-abdominale Verabreichung (Beobachtungszeit 2 Wochen) nicht-toxisch waren. Zur gleichen Zeit ist es aufgezeichnet eine 50% ige Mortalität bei Mäusen bei Dosen über die DNA-Na-Fe 50 mg / kg für intrazerebrale Verabreichung. Azidothymidin und verursacht den Tod von 50% der Mäuse bei intrazerebraler Verabreichung in Dosen von 10 bis 50 mg / kg Tiergewicht. Charakteristischer die Komplexe, praktisch jede Art der Verabreichung, wird antivirale Aktivität beibehalten, in der gleichen Zeit wie die von AZT ist besser in intrazerebrale, subkutane und intraperitoneale Verabreichung ausgedrückt.

Die vorgeschlagenen Komplexe von Na-DNA-Metall besitzen eine ausgeprägte anti-HIV-Aktivität; ihre antivirale Aktivität mit geringer Toxizität kombiniert praktisch jedes Verfahren zur Herstellung einer Dosis von 10-50 mg / kg und antivirale Aktivität manifestiert Verabreichen praktisch jeder Art der Verabreichung.

Beispiel Beispiel 1 Das Experiment verwendet, um eine Zellkultur von kontinuierlichen Linien CEM-SS und MT-4. Zellen in einer Konzentration von 0,03- 0,05 kultiviert · 10 6 Zellen pro 1 ml Medium RRMI 1640 mit 10% fötalem Kälberserum, 300 ug / ml L-Glutamin, 100 ug / ml Gentamycin und in Suspension gezüchtet. Die Lebensfähigkeit der Zellen wurde durch Färbung mit einer 0,4% igen Lösung trepanovogo blau verifiziert. Als Quelle der Virusstämme verwendet HIV / IVS und HIV-1 HT2V / IIIB. Die Zellsuspension wurde in eine 24-Well-Platten gelegt wurden mit verschiedenen Dosen einer komplexen DNA-Na-Zn bei einem Verhältnis von DNA und Metall (M / M) 1: 1 behandelt; 4: 9; 03.10; 0,5: 350; 1: 1000; 1: 1100 und mit HIV infiziert. Die Multiplizität der Infektion betrug 0,01 TSD 50 pro Zelle. Die Kulturen wurden bei 37 ° C in einer Atmosphäre mit 5% CO 2 bei 98% Luftfeuchte für 5-7 Tage , bis cytopathische Wirkung Bestimmung Virus in Zellkultur inkubiert. Zur Beurteilung verwendet, um die Bildung von Virus-Antigen-Enzym-Immunoassay.

In dem Experiment wurde gezeigt, dass die Zahl der Syncytien in Prozent der Kontrolle für die Virus-DNA in einem Verhältnis von 3.10 Metall 25% bei 69% der lebensfähigen Zellen betrug; bei einem Verhältnis von 0,5: 350 bis 35% bei 81,2% der lebenden Zellen; in einem Verhältnis von 1: 1000 von 70% und 84,3% lebensfähige Zellen bei einem Verhältnis von 1: 1100 bis 100% und 86,2% lebensfähige Zellen.

BEISPIEL Beispiel 2. Experimentelle Herstellung wie in Beispiel 1.

Die Zellsuspension mit verschiedenen Dosen einer komplexen DNA-Na-Nickel unter den gleichen Komponentenverhältnis wie in Beispiel 1 behandelt wurde, das Experiment zeigt, dass die Zahl der Syncytien in Prozent der Kontrolle durch das Virus bei einem DNA: Nickel 0,5 03.10 350 entsprach Null für die Lebensfähigkeit der Zellen 71 und 79% bei einem Verhältnis von 1: 1000 mit 68% 84,3% lebensfähige Zellen bei einem Verhältnis von 1: 1100 bis 87,5% bei 100% lebensfähige Zellen.

BEISPIEL Beispiel 3. Experimentelle Herstellung wie in Beispiel 1.

Die Zellsuspension mit verschiedenen Dosen einer komplexen DNA-Na-Co unter dem gleichen Komponentenverhältnis wie in Beispiel behandelt wurde, 1. Das Experiment zeigt, dass die Zahl der Syncytien in Prozent der Kontrolle durch das Virus bei einer DNA-Na-Co 3.10 bis 10% Lebensfähigkeit entspricht 78,4% der Zellen in einem Verhältnis von 0,5: 350 bis 15% Lebensfähigkeit der Zellen bei 87,1 in einem Verhältnis von 1: 1000 mit 66% Lebensfähigkeit und 76,3% bei 1: 1100 bzw. war Lebensfähigkeit 82,1%

Beispiel 4. Beispiel Formulierungs Experiment wie in Beispiel 1.

Die Zellsuspension mit verschiedenen Dosen einer komplexen DNA-Na-Eisen, mit den gleichen Anteilen der Komponenten wie in Beispiel behandelt wurde, 1. Das Experiment zeigt, dass die Zahl der Syncytien in Prozent der Kontrolle durch das Virus bei einer DNA-Fe 3:10 0,5: 350 0 entspricht der Lebensfähigkeit der Zellen, die jeweils 79,3 und 82,1%, wenn das Verhältnis von Fe DNA von 1: 1000 die Anzahl von Synzytien in 61% Lebensfähigkeit der Zellen zu 81,7, bei einem Verhältnis von 1: 1100 bis 100% bei 84,5% Lebensfähigkeit

Somit veranschaulichen diese Beispiele die hohe Anti-HIV-Aktivität des vorgeschlagenen Verfahrens mit geringer Toxizität.

Ein solches Verfahren ist gegenüber den bekannten die folgenden Vorteile: hohe anti-HIV-Aktivität in Kombination mit einer geringen Toxizität, wirksam bei niedrigen Dosen für jede Art der Verabreichung, die in unterschiedlichen klinischen Formen von AIDS eine ausreichende Verabreichungsweg des Arzneimittels ermöglicht die Auswahl. Das Verfahren kann für die klinische Studie empfohlen werden.

FORDERUNGEN

VERFAHREN ZUR UNTERDRÜCKUNG VON HIV, umfassend eine Präparation von Nukleinsäuren Verabreichung, dadurch gekennzeichnet, dass die Zubereitung von Stör milt abgeleitet, mindestens 80% des Natriumsalzes der nativen DNA-Molekulargewicht enthält, 270500 x 10 3 D in einem molaren Verhältnis von 29,0 Nucleotide Adenin, Thymin, 27,0, 22,0 Guanin, Cytosin 20.0, in Kombination mit nicht-toxischen mehrwertiges Metall in einem Molverhältnis 1 1 1 1000 , die subkutan verabreicht wird, intraperitoneal oder in den Spinalkanal, in Abhängigkeit von der klinischen Form der Krankheit, die geeignete therapeutische Dosis zu wählen.

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Erscheinungsdatum 06.01.2007gg