Erfindung
Russische Föderation Patent RU2249433

Verfahren zur Diagnose der chronischen Pankreatitis entwickeln auf dem Hintergrund Zwolffingerdarmgeschwur

Verfahren zur Diagnose der chronischen Pankreatitis, ausgenommen
DER HINTERGRUND Zwolffingerdarmgeschwur

Name des Erfinders: Kokueva OV (RU); Romanov JL (RU); Mihayloshina EV (RU); Cymbalyuk YM
Der Name des Patentinhabers: Rossysky Centrum für Funktionelle Chirurgische Gastroenterologie (RU); Kokueva Olga (RU); Jeanne L. Romanowa (RU); Mihayloshina Elena (RU); Cymbalyuk Juri Michailowitsch
Korrespondenzanschrift: 350063, Krasnodar, ul. Sedin, 4, RTSFHG, Kopf. Patentabteilung TA Doroninoj
Startdatum des Patents: 2002.04.15

Die Erfindung bezieht sich auf die Medizin, insbesondere auf der Gastroenterologie. Das Verfahren verbessert die Genauigkeit der Diagnose der chronischen Pankreatitis, der auf dem Hintergrund des Ulcus duodeni entwickelt, und außerdem ist es leicht durchzuführen. Führen die klinischen Anzeichen und die Höhe der Pankreasenzyme im Blut, während sie mit normalen Serumenzyme chronische Pankreatitis durch weitere Bestimmung der Abweichung von der normalen Inhalt ihrer Ebenen nach 5-facher intramuskulär Patienten imunofana und charakteristische Veränderungen des Immunstatus des Patienten diagnostiziert wird.

BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG

Die Erfindung bezieht sich auf die Medizin, insbesondere der Immunologie und Gastroenterologie und möglicherweise eine Anwendung in der Diagnostik der chronischen Pankreatitis (CP) zu finden.

Die statistische Analyse zeigt, dass Zwölffingerdarmgeschwür (Ulcus duodeni) leiden etwa 10% der Bevölkerung in der Welt. Lang, häufig rezidivierenden Verlauf des Ulcus duodeni in 63-100% der Fälle führt zu irreversiblen Veränderungen in pankreatischen Struktur und Funktion, um die Entwicklung der sekundären CP beiträgt (Sukhov NA, 1992, Kokueva OV, 1998). Die Niederlage der Bauchspeicheldrüse wird durch Immunzellen als Folge der Erschöpfung der Reserven der Immunantwort und Abbau der immunologischen Toleranz bei Patienten mit Ulcus duodeni vermittelt. Entwicklung auf dem Hintergrund der chronischen Pankreatitis Ulcus duodeni erzeugt ein neues Symptom, und die Gewichtung für die zugrunde liegende Krankheit verändert. Um die Entwicklung von CP bei Patienten mit Ulcus duodeni kann es in einem frühen Stadium zu diagnostizieren, lange vor der Manifestation von Funktionsstörungen zu verhindern.

Bei der Diagnose von CP spielt eine wichtige Rolle enthüllt hyperenzymemia, die durch die quantitative Bestimmung von Serum-Amylase Blut Lipase, Trypsin (Referenz "Medizinische Labortechnologien", St. Petersburg, 1999, Band 2, str.19-20 wurde untersucht, 39- ... 41, 20-21, Biochemische Methoden der Untersuchung in der Klinik Moskau, 1969, str.186-191, Boger 206-208 MM, Forschungsmethoden, Bauchspeicheldrüse, Novosibirsk: Nauka, 1982, str.80-94) .

In der klinischen Praxis oft Amylase-Aktivität untersucht, da es ein spezifisches Substrat, und für dieses Enzym seine unkomplizierte Methoden bestimmen. Es gibt drei Hauptgruppen von Verfahren von Amylase in biologischen Flüssigkeiten study:

1) reduktometricheskie basierend auf der Bestimmung der Stärke von Zuckern hergestellt werden;

2) amiloklasticheskie basierend auf der Bestimmung der Menge an nicht-Spaltung von Stärke durch Reaktion mit Jod;

3) hromoliticheskie basierend auf der Verwendung der Farbstoff-Substrat-Komplexe, die unter Einwirkung von Amylase zersetzen wasserlöslichen Farbstoff.

Die Lipase-Aktivität wurde in den meisten titrimetrischen Verfahren bestimmt basierend auf der Menge des freigesetzten Fettsäure durch die Wirkung des Enzyms zu bestimmen. Diese Methoden unterscheiden sich in das Substrat verwendet: Olivenöl, Tween, terbutirin. Die photometrische Verfahren zur Lipase mit der Einführung von speziellen Reaktions Reagens assoziiert ist. Verwendete einheitliche turbidimetrischen Methode verwendet, bei denen als Substrat Olivenöl.

Trypsin wurde in Serum bestimmt durch seine Aktivität Erlanger et al untersucht. Änderung VA Shornikova. Das Verfahren basiert auf der Spaltung mit Trypsin farblosen synthetischen Substrat benzoilarginin-p-nitroanilid bildende farbige p-nitroanilin, dessen Nummer kalibrimetricheski bestimmt.

Allerdings ist die Aktivität von Pankreas-Enzyme im Blut häufig schwierig, das Vorhandensein und die Schwere von CP zu beurteilen, da die Krankheit mit Ulcus duodeni kombiniert wird oft nicht durch eine Erhöhung der Aktivität von Enzymen begleitet. In diesen Fällen sind die verwendeten Methoden haben keinen signifikanten Wert und HP möglicherweise nicht rechtzeitig diagnostiziert werden, was den Verlauf von entzündlichen und degenerativen Prozessen in der Bauchspeicheldrüse mit Verletzung ihrer funktionellen Aktivität führen wird, die Manifestation der Krankheit und Komplikationen aufgrund von Mangel an aktuellen pathogenetische Behandlung.

Als Tochterunternehmen des Verfahrens verwendet, um die HP immunologische Untersuchung von peripheren Blut identifizieren. Angewendet immunologischen Methoden werden in 3 Gruppen eingeteilt (Velbri SK Immunologische Diagnose von Pankreaserkrankungen, M., 1985):

1) Bestimmung von normalen Geweben und modifizierte Antigene von einzelnen Komponenten und Blutbestandteilen in der Bauchspeicheldrüse und Körperflüssigkeiten als Anzeichen einer Beschädigung oder Störung der Bauchspeicheldrüse;

2) Bestimmung von Antikörpern oder sensibilisierter Lymphozyten gegen Antigene Pankreas oder seine einzelnen Komponenten, Antigen-Antikörper-Komplexe Indikatoren der Immunantwort. Diese Indikatoren können die diagnostischen Kriterien der Krankheit sein;

3) Bestimmung von immunologischen Parametern, nicht zeigen direkt auf die Niederlage der Bauchspeicheldrüse, aber der Zustand des Immunsystems als Ganzes kennzeichnenden, dem Grad der Reaktivität als die Fähigkeit des Körpers, die Entwicklung des Haupt pathologischen Prozesses und seine Beständigkeit gegen Komplikationen zu widerstehen.

Wichtig ist die Tatsache, dass, wenn KP Ebene von Pankreasenzymen im Blut und Urin in der Regel nach der Normalisierung steigt und vor Pankreas-Antigen aus dem Blut verschwindet. Daher ist die Identifizierung des letzteren im Blutserum ein hochspezifisches Verfahren zur Diagnose von CP. Aber wenn sie mit HP UDD Verfahren Performance kombiniert unbefriedigend sein, weil Pankreas-Antigen in diesen in nur 1 von 7 Fällen festgestellt Patienten. Verfügbarkeit antipankreaticheskih Antikörper ist nicht spezifisch für HP, denn sie können im Blut für Krebs, Mukoviszidose des Pankreas und abwesend in schweren CP und reduzierte Reaktivität des Patienten zirkulieren, die natürlich ihren diagnostischen Wert reduziert.

In diesem Papier haben wir eine umfassende Studie über den Immunstatus eines Level-II-Bewertung des Zustands der zellulären, humoralen, phagozytische Teile des Immunsystems verwendet.

Testmaterial: peripheren venösen Blut. Unter Blut wird unter aseptischen Bedingungen aus einer Vene in den Ellenbogen sterilen silikonisierten Rohren hergestellt. In einer von ihnen durch Berechnung der Heparinlösung 10 U / ml Blut, und dann wurden 5 ml venöses Blut vorgefertigt. In einer anderen (trocken) machen 3 ml Fläschchen mit Blut.

Bewertung der Zellkomponente mit der Verwendung von monoklonalen Antikörpern gegen CD3-, CD4-, CD8-, CD16-, CD19-Lymphozyten-Rezeptoren erzeugt.

Die Fortschritte in der Forschung

Heparinisierte Blut wurde in einem Volumenverhältnis von 2: 1 mit einer 3% igen Gelatinelösung auf dem Medium 199, wird gemischt und für 20-25 Minuten in einem Thermostaten bei + 37 ° C. Nach dem Abziehen der oberen Schicht übertragen sorgfältig Pasteur-Pipette in Zentrifugenröhrchen und für 10 Minuten bei 1000 U / min in der Kälte zentrifugiert. Zum Entfernen die Erythrozytenpellet in 1 ml eines hämolytischen Puffer 1 ml oder 0,5 ml destilliertem Wasser (20-30 sec Belichtungszeit) resuspendiert, gefolgt von einer Verdünnung 20fache Volumen an phosphatgepufferter Salzlösung (PBS). Zellen wurden durch Zentrifugation bei 400-430 U / min für 20 Minuten in der Kälte und gesammelt in der Interphase mit den Lymphozyten pelletiert, mit einer Pasteurpipette. Die resultierende Lymphozytensuspension wurde dreimal in PBS gewaschen.

Die isolierten Lymphozyten wurden in dem erforderlichen Volumen PBS resuspendiert, so dass sie bis zu einer Konzentration von 1-2 Millionen / ml und 100 ml eingeführt, der Zellsuspensionen in U-förmigen 96-Well-Platte zu bringen. Die Platten wurden in der Kälte während 2 Minuten bei 1000 U / min, der Überstand entfernt und das Pellet in 100 ul von Verdünnungen von monoklonalen Antikörpern gegen das gewünschte isotonische phosphatgepufferte Lösung mit 0,5% Rinderserumalbumin und 0,02% Natriumazid zentrifugiert, resuspendiert wurde. Die Zellen wurden für 30 Minuten unter gelegentlichem sanftem Schütteln mit Antikörpern bei 4 ° C inkubiert. Nach Ablauf der Inkubationszeit Zellen für 2 Minuten bei 4ºC zentrifugiert wurden, wurde das Pellet in 150-200 ul von PBS oder Medium Waschen 199 abgeschieden resuspendiert von reextrahiert.

Die erhaltenen fixierten Proben wurden unter einem Mikroskop unter UV-Licht untersucht. Um die Ergebnisse der Reaktion mit ausreichender Sicherheit beurteilen die mindestens 200-300 Zellen in jeder Probe zu zählen.

Physiologischen Norm der relative Gehalt von Lymphozyten im Labor wurde:

- CD3 54-77%;

- CD4- 35-50%;

- CD8- 18-25%;

- CD16- 5-15%;

- CD19- 3-13%.

Titers Immunglobulin-Klassen A, M, G berechnet mathematisch basierend auf den Daten in der radialen Immunodiffusion nach Mancini Agargel-Verfahren.

Die Fortschritte in der Forschung

Bei einer Temperatur von 55-56 ° C wird mit Agar entsprechende Antiserum in einem Verhältnis von 3: 1 gemischt. Schnell wurde das Gemisch in eine Glaspetrischale gegossen, auf einem horizontalen Tisch liegen. Nach dem Erstarren des Agar 33 Vertiefungen stanzen darin Prägungs schablonierte, jede Vertiefung Pasteur pipettiert 5 ml des Testserums in mittleren bis vier Vertiefungen einer 4-fachen Verdünnungen von Testserum mit bekannter Immunglobuline zugegeben. Die Platten wurden für 24-48 Stunden bei 4 ° C in einer feuchten Umgebung in einer streng horizontalen Position platziert (und für jga jgg - 24 Stunden für die JGM - 48 Stunden). Nach 24 bis 48 Stunden die Reaktion in Betracht. Mit schrägen Beleuchtung Fällung Ring sichtbar wird und von einem Lineal gemessen. Durchmesser Ringe um die Vertiefungen mit dem Testserum Kalibrierungskurve auf halblogarithmischen Papier. Wenn der Konstruktion berücksichtigt die Tatsache, dass in einem bestimmten Bereich von Konzentrationen von Immunglobulinen Durchmesser des Rings zu dem Logarithmus der Konzentration der Immunglobuline direkt proportional ist.

den Durchmesser des Rings in den Testproben aus der Eichkurve schätzen die Konzentration der betreffenden Klasse von Immunglobulin in den Testproben Nach der Messung.

Konzentration, ausgedrückt als ME oder mg Protein pro 100 ml (mg%) oder g / L (das SI-System).

Physiologisch normales Immunglobulin-Gehalt:

- Jga - 0,7-3,0 g / l;

- Jgg - 8,0-16,0 g / l;

- JGM - 0,8-2,5 g / l.

Die Höhe der Serumgesamtanteil von zirkulierenden Immunkomplexen (CIC) wurde durch Ausfällen mit einer Lösung von 3,5% Polyethylenglykol (PEG) beurteilt.

Materialien und Geräte:

- Isotonische Natriumchloridlösung;

- 7% PEG-Lösung;

- 0,1 n. Natronlauge;

- Zentrifuge;

- Spektralphotometer;

- Zentrifugenröhrchen;

Pipette 1 ml und 5 ml -.

Reagenzien.

7% ige Lösung PEG 7 g PEG gelöst, um 100 ml Boratpuffer (pH 8.4). Der Boratpuffer wurde durch Mischen von 55 ml von 1,24% Borsäure-Lösung und 1,9 ml 45% Borax-Lösung hergestellt wurde mit destilliertem Wasser auf 200 ml eingestellt. 3,5% PEG-Lösung: 20 ml 7% PEG-Lösung und 20 ml Boratpuffer. 0,1 N. Natriumhydroxid-Lösung: 4 g NaOH in 1 ml destilliertem Wasser verdünnt.

Herstellungsmethode

Das Serum wurde im Verhältnis 1:25 (0,1 ml + 2,5 ml) mit isotonischer Kochsalzlösung verdünnt. 1 (0,5 ml + 0,5 ml): Das verdünnte Serum wurde in einem Verhältnis von 1 mit 7% PEG-Lösung gemischt. Für die Fällung Reaktionsrohre in einem Kühlschrank für 18 Stunden bei 4 ° C gegeben Durchführung. Die Röhrchen wurden für 15 Minuten bei 1500 U / min zentrifugiert und der Überstand entfernt. Als nächstes wurde der Niederschlag in 2,5 ml 0,1N gelöst. NaOH-Lösung gründlich gerührt und für mindestens 30 Minuten bei Raumtemperatur stehen gelassen. Die Proben werden mit einem Spektrophotometer, einer Wellenlänge von 280 nm gegen 0,1 N gemessen. NaOH-Lösung. CEC Ebenen ausgedrückt in Einheiten der optischen Dichte. CEC level durch Ausfällen von 3,5% igen Lösung von PEG bestimmt, in der Regel nicht zu überschreiten 0.110 Einheiten der optischen Dichte.

Aufnehmende Aktivität von Neutrophilen und die Vollständigkeit der Phagozytose wurde durch Reaktion mit der lebendigen Kultur von Staphylococcus aureus (Stamm 209) untersucht.

Die Fortschritte in der Forschung

venösen Bluttropfen in einer Menge von 0,1 ml wird auf einer sauberen Mager das Deckglas platziert. Dessen in einer feuchten Kammer für 45 Minuten bei 37 ° C gehalten, wonach das Gerinnsel vorsichtig mit einer Pinzette entfernt. Das Deckglas mit aufgesetzter Neutrophile wurden in Hanks-Lösung gewaschen, um die berechnete Tagesdosis Staf Kultur verursacht. aureus und wieder in einer feuchten Kammer für 30 Minuten bei 37 ° C gestellt. Nach der Inkubation wird der Objektträger in Hanks-Lösung gewaschen, um nicht-absorbierten Partikel zu entfernen, und getrocknet. Das getrocknete Medikament beheben und malen Romanowski-Giemsa.

phagozytischen Nummer - - und die Anzahl der absorbierten Teilchen pro einer Neutrophilen - phagozytische Index Phagozytose Buchhaltung wird durch Bestimmung der Prozentsatz von Neutrophilen mit phagozytischen Material durchgeführt. In jedem Präparat wurden wenigstens 200 Zellen gezählt. Physiologische Standards für die Labor:

- Absorbing Aktivität - 50-70%;

- Phagozytische Nummer - 2,2-4,3;

- Phagozytische Index - 1,4-2,5;

- Magen-Darm-Aktivität - 70-94%;

- Aufschluss Index - 1,3-2,0.

Im Hinblick auf die Diagnose der Enzymspiegel verwendeten wir:

I. Die spektrophotometrische Bestimmung der Änderung der Trübung von Olivenöl Suspension unter Einwirkung von Lipase (Reference "Medical Laboratory Technology", Band 2, St. Petersburg, 1999, s.39-41).

Die spezifische Substrat für Lipase wird triomin (Olivenöl).

Bestimmung der Lipase-Aktivität Tietze.

Unter dem Einfluss von Lipase Olivenöl wird in Fettsäuren gespalten, die mit Alkali titriert werden. Entsprechend der Anzahl, die zur Titration von Alkali auf Lipaseaktivität beurteilt ging.

Reagenzien:

1. Olivenöl-Emulsion: 93 ml destilliertem Wasser; 0,2 g Natriumbenzoat und 7 ml Gummiarabicum wurden gut gemischt. Zu dieser Mischung werden 93 mg Olivenöl hinzugefügt (langsam). Dann wird das Gemisch zunächst für 10-15 Minuten emulgiert bei niedrigen und dann hohen Geschwindigkeiten.

2. 0,2 M Tris pH 8,0 Puffer: 50 ml 0,4 M Tris gidroksimetilaminometana-Lösung (48,4 g / l) wurde mit 26,8 ml 0,4 n gemischt. Salzsäure und das Volumen wurde mit destilliertem Wasser auf 100 ml eingestellt.

3. Indikator: 1 g Thymolphthalein in 100 ml Ethanol gelöst.

4. 0,05 n. Natronlauge keine Carbonate, titriert, bis die blaue Farbe enthält. Die Differenz in der Menge von 0,05 N. Natriumhydroxid auf die Erfahrung und die Kontrolle über die Lipaseaktivität in den Einheiten Tietz verbraucht.

Tabelle 1
Studiengang Erfahrung Kontrolle
Puffer 1.0 1.0
Olivenöl-Emulsion 0,5 0,5
destilliertes Wasser 2.5 2.5
Blutserum 1.0 -
Mischung, dann 2 Stunden bei 37 ° C in einem Ofen inkubiert
den Inhalt aller Rohre in dem Erlenmeyerkolben mit 50 ml zu übertragen
Ethanol 3.0 3.0
Blutserum - 1.0
1% igen Lösung von Thymolphthalein 4 Tropfen 4 Tropfen
Titration von 0,05 N. Natriumhydroxid

II. Die Ermittlung der Höhe der Trypsin photometrisches Verfahren. Das Verfahren basiert auf der Fähigkeit von Trypsin das chromogene Substrat zu hydrolysieren N- eine -tozil-L-arginin-4-nitroanilid. Das resultierende 4-nitroanilid wird photometrisch bestimmt.

Bestimmung der Trypsin-Aktivität Heverbeku-Erlanger.

Ausstattung:

- Spektrophotometer, Thermostat. Grundreagenzien:

- Tris;

- Calciumchlorid;

- Dimethylformamid;

- 0.001 vor Christus. Salzsäure;

- 0,1 & mgr; M Nitranilin: 13,8 g Nitroanilin in 1 Liter destilliertem Wasser verdünnt;

- Kaliumchlorid 0,14 N;.

- Benzoyl-arginin-p-nitroanilin (BAPNA);

- Essigsäure, 30% ige Lösung.

Arbeitslösungen:

1. Tris-Puffer 0,2 M pH 7,8: 24,23 g Tris und 3,67 g Calciumchlorid in 800 ml destilliertem Wasser verdünnt, pH auf 7,8 mit 2N eingestellt. Chlorwasserstoffsäurelösung. Dann wird das Volumen mit destilliertem Wasser auf 1000 ml eingestellt.

2. Die Substratlösung (20 mg%) 2 mg BAPNA unter leichtem Erwärmen, gelöst in 0,1 ml Dimethylformamid, dann zu Tris-Puffer 10 ml.

3. 30% iger Essigsäurelösung.

Das Serum wurde 1: 2 0,14 n. Natriumchloridlösung. Die optische Dichte der Flüssigkeit wird mit einem Spektrophotometer bei einer Wellenlänge von 410 nm bestimmt.

Um die Konzentration von p-nitroanilin berechnen folgt eine Kalibrierungskurve zu konstruieren. Eine Einheit der Trypsin-Aktivität wird eine solche Aktivität definiert, in dem 1 mM Substrat pro Minute gespalten. Trypsin-Aktivität wird durch die Differenz der Konzentration der para-nitroanilin Test- und Kontrollröhrchen bestimmt. Angesichts der Inkubationszeit und Verdünnung von Trypsin-Aktivität im Blutserum wird durch die Formel berechnet:

Eo - das Aussterben der Erfahrung;

Ek - Aussterben Kontrolle;

A - Optische Dichte Faktor durch Dividieren der Konzentration von Blut in den Rohren der Kalibrierungskurve für die Absorption erhalten.

Tabelle 2
Studiengang Erfahrung Kontrolle
eine Serumverdünnung 0,5 0,5
Substrat 4.0 4.0
Essigsäure - 1
termostirovanie 30 Minuten bei 37 ° C
Essigsäure 1 -
Photometrie

Bei gesunden Menschen ist die Trypsin-Aktivität im Blut im Bereich 0-4 Med. / Ml.

III. Um die Aktivität der Amylase untersuchen als Prototyp wir eine standardisierte Methode amiloklastichesky mit resistenten Stärkesubstrat (Methode Karaveya) (Referenz "Medical Laboratory Technology", St. Petersburg, 1999, Band 2, s.20-21) verwendet. Das Prinzip des Verfahrens besteht darin, dass die Spaltung Amylase Stärke hydrolisiert nicht um das Endprodukt zu bilden, keine Farbreaktion mit Jod geben. Die Aktivität der Amylase Richter Farbintensität zu verringern.

Ausstattung:

- Fotoelektrokolorimert Wasserbad.

Reagenzien:

1. 2% Stärkelösung: bis es gelöst zu 1 ml kaltem destilliertem Wasser wurden 200 mg Stärke zugesetzt, sie rühren und dann mit 7,6 ml heißem destilliertem Wasser und in ein Bad mit kochendem Wasser nachgefüllt. Danach wurde das Volumen mit destilliertem Wasser auf 10 ml eingestellt. Das Substrat muss transparent sein.

2. Die Phosphat-gepufferte Kochsalzlösung pH 7.1. Zu ihrer Herstellung 7,62 g Kaliumdihydrogenphosphat (KP 2 PO 4) und 20.45 g Dinatriumhydrogenphosphat (Na 2 HPO 4) gemischt wurde, wurde das Volumen mit destilliertem Wasser auf 1000 ml eingestellt.

3. 3% Natriumchloridlösung.

4. 0,1 N. Iodlösung: 3 g Kaliumiodid in 2,5 ml destilliertem Wasser eingebracht wurden, wurden 1,2 g kristallines Iod und das Volumen mit destilliertem Wasser auf 10 ml eingestellt.

5. 1N. Chlorwasserstoffsäurelösung.

Tabelle 3
Studiengang Erfahrung Kontrolle
Stärkelösung 5 5
Puffer 3 3
Salzlösung 1 1
gemischt und erhitzt für 10 Minuten bei 37 ° C
Blutserum 1 1
1N. Salzsäure - 2
thermostatisiert und bei 37 ° C für 30 Minuten mischen
1N. Salzsäure 2 -
0,2 ml jeder Test und Kontrolle in einem Kolben mit einer Iod-Lösung wurde gemischt,
Photometrie

Zur Vorbereitung wird die Arbeitslösung in der Iodkolben 50 ml mit 40 ml destilliertem Wasser, 0,5 ml 1N. Chlorwasserstoffsäurelösung und 0,1 N. Jodlösung. Anzahl der Fläschchen, müssen die Anzahl von Rohren mit Erfahrung und Kontrolle entsprechen. Photometrie wird in der Küvette 1 ml mit einem roten Filter (Wellenlänge 630-69 NMC) gegen Wasser durchgeführt.

Ek - Aussterben Kontrolle;

Eo - das Aussterben der Erfahrung;

A - Optische Dichte Faktor durch Dividieren der Konzentration von Blut in den Rohren der Kalibrierungskurve für die Absorption erhalten. Dieser Faktor spiegelt die Konzentration von para-nitroanilin eines der optischen Dichte entspricht.

Einheit Amylase-Aktivität auf 10 mg Stärke entspricht, verdauten Inkubation bei 37 ° C für 30 Minuten zur Verfügung gestellt Normalerweise Amylase-Aktivität im Blutserum ist 80-120 Einheiten.

Der Hauptnachteil der in der Studie verwendeten Enzymverfahren abgeschlossen ihrer geringen Informationsgehalt bei Patienten mit Ulcus duodeni kompliziert durch HP, wenn der Pegel des Enzyms in den Normalbereich entspricht.

Aufgabe der Erfindung ist es, die Genauigkeit und Aktualität der Diagnose von CP zu verbessern, die auf dem Hintergrund der Zwölffingerdarmgeschwür entwickelt.

Das Wesen der Erfindung ist, dass bei normalem Pankreas-Enzym in peripherem Blut HP durch weitere Bestimmung der Abweichung des Niveaus von physiologischen Werten und Parametern charakteristischen Änderungen des Patienten, nachdem das Fünffache Immunogramm intramuskulär Patienten immunotropen Zubereitung imunofana 0,005% bis 1 ml pro Tag diagnostiziert.

Das Verfahren ist wie folgt. Ein Patient leidet Zwolffingerdarmgeschwur, identifizieren spezifische Beschwerden über Schmerzen im linken oberen Quadranten, Magenschmerzen, mit Ausstrahlung in den Rücken, Gewichtsverlust, instabile Stuhl, Übelkeit. Objektive Untersuchung zeigt, Zartheit in pancreatoduodenal Zone, positive Symptome Mayo-Robson und Kacha. Produzieren Instrumental Studie, die Anwesenheit von Zwolffingerdarmgeschwur bestätigt und verfügt über HP: esophagogastroduodenoscopy, Ultraschall-Untersuchung. Blutproben von erkrankten Venen ausüben und das Niveau der Amylase, Lipase und Trypsin, führen eine umfassende Untersuchung des Immunstatus bestimmen. Wenn periphere Blutanalysedaten für hyperfermentemia empfangenen Indikatoren des Immunstatus auf physiologische Werte entsprechen, dh diagnostischen HP akuten Symptome identifiziert. Der Patient wird imunofan 0,005% bis 1 ml in einem Tag verabreicht intramuskulär № 5. Das Medikament hat immunostimulierende Wirkung Lage in den ersten 2-3 Tage nach der Injektion und die Produktion von Antikörpern durch erhöhte Serum opsonierende Fähigkeit phagozytischen Neutrophilen zu stimulieren, zu erhöhen. Patienten mit Autoimmunerkrankungen, unabhängig von der Aktivität Prozess der Verabreichung des Arzneimittels bewirkt eine vorübergehende Verschlimmerung von immune Entzündung. Nach 3-4 Tagen, nehmen Sie wieder die Patienten Blut aus einer peripheren Vene die Ebenen von Enzymen und umfassende Bewertung der Immunstatus Dynamik zu studieren. Bei der Identifizierung hyperenzymemia bezüglich der Norm und giposupressornogo Typ des Immunsystems (die Unwucht Subpopulationen von T-Lymphozyten mit einer Prävalenz von Content-Helferzellen, Mangel an CD3 und CD8-Lymphozyten und erhöhte immun Index; hyperimmunen alle wichtigen oder einzelne Klassen von Immunglobulinen und erhöhte zirkulierende Immunkomplexe, Erschöpfung funktionelle Aktivität von Phagozyten und unvollständiger Phagozytose) mit CP diagnostiziert, die vor dem Hintergrund der Zwölffingerdarmgeschwür entwickelt.

Beispiel 1

Patient S., Krankengeschichte Nummer 4731.

Er erhielt gastroenterologischen Medizin-Abteilung des Krasnodar Regional Hospital mit Beschwerden von Magenschmerzen, Übelkeit nach dem Essen, Schwäche.

Aus der Geschichte: UDD seit etwa 20 Jahren krank.

Sachlich bei Eintritt: Magenschmerzen bei der Palpation in der Magen, sowohl Hypochondrie, im Verlauf der Projektion der Bauchspeicheldrüse, die positiven Symptome der Mayo-Robson und Kacha.

Wenn die instrumentale und Laborstudien wurden identifiziert: auf esophagogastroduodenoscopy Narbe Magen-Darm-Bulbus Deformation esogastritis, bulbit; indirekte Anzeichen für Pathologie panktreato-biliäre Zone (Schleim- postbulbarnyh Abteilungen mit telelimfoangioektaziyami).

Ultraschall-Untersuchung: Bauchspeicheldrüse Größen im normalen Bereich, die Konturen ihrer rauen, ECHO terogenität verbesserte diffuse ungleichmäßige Struktur. Fazit: Die Ultraschall Anzeichen von CP.

In der Studie der enzymatischen Aktivität der Bauchspeicheldrüse Indikatoren gehen nicht über die Obergrenze des Normalbereichs.

In der immunologischen moderate T-Zell-Mangel aufgrund CD4-Lymphozyten, Depression absorbierende Aktivität von Neutrophilen. Der Gehalt an Immunglobulinen und CEC - im normalen Bereich.

Fünfmalige Patienten erzeugt intramuskuläre Verabreichung von 1 ml der 0,005% igen Lösung imunofana einen Tag. 3 Tage nach der letzten Verabreichung von Amylase, Lipase und Trypsin wurden erneut Immunogramm sucht. Indikatoren, ausgedrückt in den folgenden Figuren im Vergleich mit den Originaldaten.

Tabelle 4
untersucht den Wert von Ausgangsniveau nach der Einführung von imunofana Ebene
Amylase 25,0 g l / h 35,9 g, l / h
Trypsin 175,4 mmol / l 290 mmol / l
Lipase 1,2 Einheiten. 1,8 Einheiten.
CD3-Lymphozyten 52% 49%
CD4-Lymphozyten 28% 35%
CD8-Lymphozyten 20% 14%
iga 0,6 mg / ml 0,9 mg / ml
igm 1,2 mg / ml 2,8 mg / ml
Immunglobulin G 9,3 mg / ml 20 mg / ml
CEC 0,06 ed.opt.pl. 0201 ed.opt.pl.
% Phagozytose 43% 54%
% Verdauung 69% 51%

Die Daten erlaubt eine klinische Diagnose zu stellen: HP, schmerzhafte Form, natürlich in der akuten Phase der schub.

Rubtsovo Magen-Darm-Bulbus Deformation, Gastritis, bulbit.

Die Studie bestätigt, dass der Beitritt von HP in Zwölffingerdarmgeschwür, und hat es ermöglicht, die adäquate Therapie pathogenetische durchzuführen.

Beispiel 2

Patient M., Krankengeschichte Nummer 1625.

Empfangene gastroenterologischen Medizin-Abteilung des Krasnodar Regional Hospital mit Beschwerden über Schmerzen im Oberbauch, linken oberen Quadranten, nach hinten abstrahlenden, paroxysmale in der Natur tragen, Sodbrennen, Gewichtsverlust von 6 kg über 2 Monate.

Aus der Geschichte: für 10 Jahre ab Zwolffingerdarmgeschwur leiden. Wiederholt in einem Krankenhaus behandelt. Hospitalized in einer Klinik mit einer Diagnose von Zwölffingerdarmgeschwür im Prozess Exazerbation von Fading.

Objektive Daten über die Zulassung: schmerzhafte Magen epigastric Bauchspeicheldrüsen-Zwölffingerdarm-Zone Palpation positive Symptome Mayo-Robson und Kacha.

Die Untersuchung ergab folgende Auffälligkeiten: auf esophagogastroduodenoscopy Narbe Magen-Darm-Bulbus Deformierung, chronische Papillitis.

Auf Ultraschalldaten heterogen, echoreiche Pankreas Struktur. Fazit: Die Ultraschall Anzeichen von CP.

Der Gehalt an Pankreasenzymen - im normalen Bereich.

In den immunologischen Ungleichgewicht Subpopulationen von T-Lymphozyten mit einer Dominanz von Suppressor Suppressor-Reduktionsindex eine moderate Erhöhung der Absorptions Aktivität von Neutrophilen und den Inhalt der CEC hyperimmunen.

Der Patient wurde intramuskulär fünfmal 0,005% Lösung imunofana 1 ml pro Tag verabreicht. Nach 4 Tagen wiederholt Forschung produziert peripheren Blut.

Die erhaltenen Daten sind in Tabelle 5 gezeigt.

FORDERUNGEN

Verfahren zur Diagnose der chronischen Pankreatitis, der vor dem Hintergrund des Ulcus duodeni entwickelt, umfassend die klinischen Anzeichen und die Höhe der Pankreasenzyme im Blut zu bestimmen, dass mit normalen Serumenzyme chronische Pankreatitis gekennzeichnet durch weiteres Bestimmen der Abweichung von der normalen Inhalt ihrer Ebenen nach 5 diagnostiziert -fach imunofana intramuskuläre Injektion an den Patienten und die charakteristischen Veränderungen des Immunstatus des Patienten.

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Erscheinungsdatum 29.03.2007gg