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Erfindung
Russische Föderation Patent RU2089914

VERFAHREN ZUR BEWERTUNG DER LEBER PATIENT

VERFAHREN ZUR BEWERTUNG DER LEBER PATIENT

Name des Erfinders:. Gening LV; Ghazaryan K.G. Andreeva NB. Khromov IS. Ghazaryan TG. Gorbarets IP
Der Name des Patentinhabers: Institut für Molekulare Genetik, Russische Akademie der Wissenschaften
Adresse für die Korrespondenz:
Startdatum des Patents: 1994.03.11

Die Verwendung in der Medizin. Die erfindungsgemässe Gehalt Patienten Urin L-Homoserin bestimmen. Wenn der Gehalt an bis zu 8 M / L Leberzustand ist normal, aber bei diesem Indikator höher - beide Verletzungen. Index korreliert mit anderen bekannten biochemischen Indikatoren für den Zustand des Patienten Leber. Die Analyse ist einfach im Aufbau und kann auf Strom an der Routineüberprüfung der Bevölkerung und in der Kontrolle von Patienten mit Hepatitis gestellt werden.

BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG

Die Erfindung betrifft die Medizin und kann bei einer schnellen Diagnose der Bevölkerung und bei der Beurteilung von Patienten mit Hepatitis verwendet werden.

Die Leber ist ein wichtiges Organ multifunktional. Über den Zustand des Körpers wird von vielen Indikatoren beurteilt, von denen jede im allgemeinen nur eine der Funktionen der Leber zu bewerten gestattet. Somit ist das bekannte Verfahren eine Lebererkrankung der Bewertung, einschließlich der Definition von Bilirubin im Blutserum des Patienten (16, siehe Blyuger AF Novitsky in der Praxis Hepatologie Riga .. Zvayzne 1984 bis Juli 406.).

Doch nur diese Zahl zeigt Ikterus-Syndrom.

Bekannte Verfahren zur Herstellung einer Lebererkrankung Auswertung, einschließlich der Bestimmung des Gehalts von Aspartat-Aminotransferase in einem Patientenserum (siehe. Bogomolov BP Dubovitskaya NM Auswertung von diagnostischen Wert von hepatozellulären und Ausscheidungsorgane Enzyme bei der viralen Hepatitis A und B. All-Union-Konferenz über klinische Biochemie, Immunologie und Morphologie Infektionskrankheiten. Riga, pp. 278 280).

Wenn eine ausreichende Informationsgehalt dieses Indikators nicht ermöglicht es, den Zustand der Leber in seiner Gesamtheit zu untersuchen.

Bekannte Verfahren für Leber Zustand Auswertung, einschließlich der Bestimmung des Gehalts an Alanin im Patientenserum (siehe. Podymova SD Lebererkrankung. M. Medicine, 1984, S.. 75 77).

Dieser Indikator ergänzt die Liste der Indikatoren, die den Zustand der einzelnen Funktionen der Leber zu charakterisieren, sondern auch alle Informationen nicht über alle Funktionen bietet.

Bekannten Verfahren wird eine Leberzustand auszuwerten, umfassend den Prothrombin-Index in Patientenserum zu bestimmen (vgl. Shdanows VM Ananov VA Stakhanov VM Viral Hepatitis. M. Medicine 1986, pp. 143 146).

Jedoch ist keines der bekannten biochemischen Parameter nicht beurteilen eine der wichtigsten Funktionen der Leber Zustand des Methioninstoffwechsels.

Das technische Ergebnis bei der Realisierung der Erfindung erreicht wird, ist die Beurteilung einer der Funktionen der Leber Methioninstoffwechsels, die Ergebnisse einer neuen Definition von biochemischen Parametern.

Dies wird dadurch erreicht, dass in dem Verfahren eine Leber Zustand des Patienten auszuwerten, die den biochemischen Index als Indikator Bestimmens unter Verwendung des L-Homoserin in dem Urin des Patienten, und wenn dessen Gehalt höher als 8 mol pro 1 Liter (mmol / l) wird als Verletzung ausgewertet und die mehr, je höher die Zahl ausgeprägt.

L-Homoserin-Aminosäure, die nicht Teil der menschlichen und tierischen Proteinen. In Pflanzen und Mikroorganismen, es ist ein Zwischenprodukt der Biosynthese der Aminosäuren Threonin resultierenden, Isoleucin und Methionin (siehe. Cohen GN und Saint-Girons I. "E.coli und Salmonella tiphimurium Mol. Biol.", 1987, Vol. 1, p. 429 444). In Bezug auf die Verfügbarkeit von freien Homoserin bei Säugetieren, in den Prozess der Aufspaltung des Kohlenstoffgerüsts von Methionin (siehe. A. Lehninger. Biochemie. Verlag "Mir". M. 1974, S.. 523) die ersten Berichte vorgeschlagen, dass es dazu kommen sollte. Allerdings sind die Daten auf seiner qualitativ hochwertigen Inhalten in verschiedenen Säugetiergeweben oder in technischen oder nicht in der praktischen Literatur. Später ignoriert Quellen Anwesenheit Homoserin als Zwischen Methionin Zerfalls (siehe. Finkelstein JD und Martin JJ Der Jounal of Biological Chemistry, 1986, vol. 261, 4 N, p. 1582 1587), und es wird angenommen, dass das Kohlenstoffgerüst Methionin vollständig ausgenutzt .

Die Erfindung zum ersten Mal festgestellt, dass der Urin von Personen mit gesunden Leber enthält 2,5 8,0 mmol / l L-Homoserin. Nachweis im Urin des Patienten mehr als 8 mmol / l L-Homoserin zeigt eine Verletzung des Methionin-Stoffwechsels in der Leber. Je mehr diese Verletzungen ausgesprochen, so dass die Zahl höher ist.

Beispiel 1. Die Basis der verwendeten Methode der L-Homoserin in dem Urin zu bestimmen ist eine spezifische Übertragung einer Phosphatgruppe adenoziltrifosfornoy-Triphosphat (ATP) zu L-Homoserin umgesetzt Homoserin-Kinase-Enzyms. Als Ergebnis dieser enzymatischen Reaktion gomoserinfosfat gebildet, die identifiziert und isoliert werden kann, beispielsweise durch Papierchromatographie. Quantitative Übertragung in gomoserinfosfat Homoserin durch das Enzym Homoserin - Kinase und 33 P U ATP unter Verwendung als Substrat ein zweites 33 P gomoserinfosfat dessen markiertem liefert Menge nach chromatographischer Trennung radiometrisch bestimmt werden kann.

Homoserin Um Harninkontinenz in 0,1 ml Eppendorf - Zentrifugenröhrchen wurde 5 min bei 100 o C. Danach inkubiert bestimmen , wurde das Röhrchen auf Raumtemperatur und zentrifugiert für 10 min Eppendorfzentrifuge bei 14000 rpm abgekühlt. / Min wurde verwendet, um den resultierenden Überstand Homoserin zu bestimmen. Das Standardverfahren zur Bestimmung von 5 Homoserin Überstand wurde in 15 l einer Mischung, enthaltend 250 mM Tris-HCl pH 7,2; 500 mM KCL; 20 mM MgSO4; 20 m M FTF und 1 m Cl U 33 P ATP. Danach wurde zu dem Gemisch gegeben 5 ng (10 -9 g) elektrophoretisch homogene Zubereitung Homoserinkinase und E.coli für 60 Minuten bei 37 o C. Die Reaktion inkubiert wurde gestoppt , indem das Gemisch bei 100 o C Inkubation für 3 min. Zu der Mischung wurde zu kaltem gomoserinfosfat Konzentration von 1 mM zugegeben und zentrifugiert Eppendorf-Zentrifuge für 5 min bei 14.000 rpm. / Min. Chromatographie an chromatographischen Papier Watman N1 betrug 1 ul Mischung ergibt. Da die Flüssigkeitschromatographie ein Gemisch aus n-Butanol, Essigsäure-Wasser = 4 1,5 1,5 eluiert wird. Nach der Chromatographie, befleckt das getrocknete Chromatogramm mit Ninhydrin. Spot-geeignete gomoserinfosfatu ausgeschnitten und gezählt, um die Radioaktivität auf dem Mark II im Toluol-Szintillator-Zähler. Anzahl Homoserin - Kurve wurde durch die Aufnahme von 33 P in der Konzentration gomoserinfosfat Homoserin bestimmt konstruiert unter Verwendung von Standardlösungen von Homoserin.

Beispiel 2. Im Urin von 28 Patienten mit viraler Hepatitis bestimmen die L-Homoserin. Die Ergebnisse sind in der Tabelle gezeigt. 1.

Die Analyse in der Tabelle dargestellt. 1-Daten führt zu folgenden Ergebnissen: im Urin von Patienten mit akuter viraler Hepatitis B während der Höhe der Krankheit die L-Homoserin ist deutlich höher als bei Patienten mit akuter viraler Hepatitis A.

Diese Daten korrelieren mit der bekannten Tatsache, dass Hepatitis B die schwierigste fließenden Virushepatitis ist. Bei der Entlassung Patienten viraler Hepatitis B unterzogen, gab es eine signifikante Reduktion von L-Homoserin in Urin.

Die Patienten L-Homoserin-Gehalt im Urin, die über 30 mmol / l war, am stärksten übertragen Krankheit. Die Krankheit ist langwierig und erfordern intensive Therapie als Patienten, die L-Homoserin in Urin, die unter 30 mmol / l war.

Urin untersucht, 5 Patienten mit akuter Hepatitis A, auch an der Spitze der Krankheit L-Homoserin-Gehalt nicht mehr als 14 mmol / l, die jedoch höher ist als der Gehalt an L-Homoserin in dem Urin von Freiwilligen untersuchten 10 (2,5 8 mmol / l ).

Höher als im Urin von gesunden Freiwilligen, Instandhaltungen und L-Homoserin in dem Urin von Patienten mit chronischer Hepatitis C betrug 10 und 20 Mikromol / l.

Beispiel 3. Wir führten Mapping bekannter biochemischer Indices mit dem Index gemäß der Erfindung. Die Ergebnisse sind in der Tabelle gezeigt. 2 und weisen auf eine Korrelation zwischen den definierten Parametern.

Der neue Satz wird einfach definiert. Urinalysis seinen Gehalt an L-Homoserin zu bestimmen, kann in Betrieb genommen werden und bieten eine schnelle Auskunft über den Zustand der Leber von Patienten, die sowohl in ihrer Vorsorgeuntersuchungen und bei der Behandlung von Hepatitis.

FORDERUNGEN

1. Verfahren Leber Zustand des Patienten für die Auswertung, einschließlich biochemischer biologischen Flüssigkeit, wobei der Gehalt im Urin bestimmt wird, und L-Homoserin an seinem Niveau oberhalb 8 mM / L detektiert Verletzung Methionin Metabolismus in der Leber.

2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die erfaßte Verletzung des ausgeprägter, je höher der Gehalt an L-Homoserin in Urin.

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Erscheinungsdatum 29.03.2007gg